П ринцип метода: содержимое пародонтальных карманов засевают в питательную среду и после инкубации микроскопируют раздавленную каплю.

Реактивы и оборудование:

- стерильная корневая игла с турундой;

- предметное и покровное стекла;

- пробирки;

- капилляр или пипетка;

- питательная среда;

- термостат;

- микроскоп.

Забор содержимого пародонтальных карманов производят аналогично предыдущим методам, однако наиболее приемлемым является забор стерильным стоматологическим экскаватором № 2 из глубины кармана. Содержимое смывают в жидкую питательную среду, которую затем инкубируют в термостате при Т - 37° С.Культура развивается в течение 3-6 суток. По окончании срока инкубации со дна пробирки капилляром или пипеткой берут осадок, каплю помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют с об. 40, ок. 7.

Применяется много питательных сред, но основными ингридиентами их являются физиологический раствор, сыворотка и углеводы.

Рекомендуют использовать простую сывороточную среду. Она проста в приготовлении и дает хороший рост трихомонад. Для ее приготовления берут 9 частей стерильного физиологи­ческого раствора, добавляют 1 часть лошадиной или бычьей сыворотки и 1 петлю стерильного рисового крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-10 мл.

Наш опыт по культуралъной диагностике ротовых простей­ших показал, что простая сывороточная среда не всегда дает положительные результаты. Очевидно, это связано с региональ­ными физико-химическими характеристиками воды, из которой готовят физиологический раствор. Физиологический раствор, приготовленный аптекой, у нас всегда имел рН 5,1 и питатель­ная среда на таком растворе без добавления буферных солей роста трихомонад не давала.

Поэтому мы рекомендуем применять среду Павловой. Способ приготовления: хлористый натрий - 4,25 г, двузамещенный фос­форнокислый натрий /Na2HPO4 X 2 H2O2 , можно и Na2HPO4 X 12 H2O2 - 0,3 г, однозамещенный фосфорнокислый калий / K2HPO4 - 0,23 г, дистиллированная вода - 500,0 мл. Раст­вор стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм в течение 20 минут. Перед засеванием материала раствор разливают в пробирки по 9,5 мл, добавляют О,5 мл лошадиной сыворотки и петлю стериль­ного рисового крахмала.

В качестве сыворотки применяют нормальную лошадиную сыворотку для приготовления питательных сред или сыворотку лошадиную сухую. Предварительно флакон с нормальной лошадиной сывороткой раскупоривают и оставляет в термостате на 3-е су­ток для испарения консерванта, а сухую растворяют в дистил­лированной воде.

Культуральным методом на среде Павловой десневые амебы выявлены в незначительном числе /3,74% из всех положитель­ных результатов, полученных другими протозоологическими ме­тодами/, поэтому для выделения их лучше использовать среду следующего состава: физиологический раствор - 1000,0 мл, мясо-пептонный бульон - 20,0 мл, печеночный экстракт -20,0 мл, глюкоза - 2,5 г, Na2HPO4- 0,45 г, K2HPO4 - 0,45 г, рН = 7,4- 7,8, К простерилизованной среде добавляют 10,0 -15,0 мл инактивированной лошадиной сыворотки, разливают в пробирки; по 6— 10,0 мл ив каждую вносят 1-2 петли стерильного рисового крахмала.

Амебы развиваются в щелочной среде, а трихомонады предпочитают кислую.

Рост трихомонад на жидкой питательной среде Павловой выявлен в 76,92% среди всех положительных случаев. Определение в культуре этих простейших не представляет особого тру­да, посколько в поле зрения скапливается от 5 до 30-50 осо­бей. Незначительная часть ротовых трихомонад имеет тот же вид, что и в нативном препарате. Подавляющее же число особей округляется, приобретает шарообразную форму. В цитоплазме видны заглоченные зерна крахмала. Выбрасывание жгутиков ак­тивное, у некоторых крупных трихомонад можно увидеть движение ундулирующей мембраны в виде волны, пробегающей подлиннику тела.

Смотрите также

Дыхательная недостаточность
Представляет собой такое состояние организма, при котором либо лёгкие не обеспечивают поддержание нормального газового состава крови, либо последнее достигается за счёт нормальной работы аппарата в ...

Диагностика и консервативное лечение асимметрии таза у детей
Интенсивность промышленного освоения Восточной Сибири и связанный с этим высокий уровень загрязнения среды обитания вызвали необходимость изучения экологически обусловленной патологии опорно ...

История вопроса
В 1952 году была обнаружена специфическая эффективность хлорпромазина (аминазина) и резепина при лечении психических больных. Вскоре были синтезированы и изучены многочисленные аналоги аминазина и ...